Hiện giờ, theo đơn tế bào nhiều tổ học phân tích kỹ thuật phát triển, các nhà khoa học ở tế bào phần tử dị chất tính thượng nghiên cứu cũng càng thêm thâm nhập.

Ở nhiều tế bào sinh vật trung, tế bào gian sai biệt tính phi thường đại, rất khó phát hiện hai cái ở công năng, hình thái chờ các phương diện hoàn toàn tương đồng tế bào, bởi vậy yêu cầu từ đơn tế bào cấp bậc vào tay, đối này dị chất tính tiến hành phân tích. Cùng lúc đó, bao hàm đơn tế bào gien tổ học, bề mặt di truyền học, sang băng tổ học chờ ở nội nhiều tổ học kỹ thuật, đã có thể thực hiện đối đơn cái tế bào tính chất cùng công năng toàn diện nghiên cứu.

Cứ việc như thế, đơn tế bào nhiều tổ học phân tích kỹ thuật vẫn như cũ tồn tại khuyết tật cùng không đủ. Tỷ như, nếu muốn tiến thêm một bước thâm nhập mà hiểu biết tế bào phát huy công năng, nhất định phải biết này có khả năng phân bố công năng lòng trắng trứng, còn có cường độ cùng khi tự tính, và là như thế nào giới đạo tế bào gian thông tin cùng điều tiết khống chế. Mà một cái hiện thực vấn đề là, kể trên kỹ thuật trước mắt còn vô pháp thực hiện đối công năng tính lòng trắng trứng phân bố đo lường.

Vì giải quyết kể trên vấn đề, sắp tới, đến từ Singapore quốc lập đại học nghiên cứu đoàn đội khai phá một loại căn cứ vào cao thông lượng trắc tự phương pháp ( time-resolved assessment of protein secretion from single cells by sequencing, TRAPS-seq ), thông qua đối đơn tế bào protein phân bố tiến hành thời gian phân biệt đánh giá, thực hiện ở đơn tế bào trình độ thượng đối phân bố lòng trắng trứng, tế bào mặt ngoài biểu hình đánh dấu cùng sang băng tổ đồng thời đo lường.

Quấy nhiễu tố γ ( Interferon gamma, IFNγ ), bạch cầu giới tố -2 ( Interleukin-2, IL-2 ) cùng u hoại tử ước số ( Tumor Necrosis Factor, TNF ) chờ Th1 tế bào ước số là xúc tiến kháng nguyên đặc dị tính miễn dịch phản ứng mấu chốt ước số. Nhưng tương quan lĩnh vực nhân viên nghiên cứu, đối này ở thời gian cùng cường độ thượng phân bố hình thức, cùng với tiềm tàng tế bào cùng phân tích đặc thù, còn chưa từng rõ ràng thăm minh.

Căn cứ vào kể trên phương pháp, nên đoàn đội lựa chọn tế bào hoạt hoá sau ba cái thời gian điểm ( 1 giờ, 6 giờ cùng 16 giờ ), cũng nhất nhất nghiên cứu từ kháng CD3/CD28 hơi cầu kích hoạt người tuyến dịch lim-pha tế bào tế bào ước số phân bố tình huống.

Bọn họ phát hiện, tế bào ước số lòng trắng trứng phân bố cùng gien biểu đạt ở thời gian cùng cường độ phương diện tồn tại sai biệt. Nói cách khác, ở lúc đầu kích hoạt ( 0-1 giờ ) trong lúc, tế bào ước số mRNA biểu đạt trước với phân bố lòng trắng trứng, này phản ứng lòng trắng trứng từ tế bào trung phiên dịch cùng phân bố yêu cầu thêm vào thời gian; ở trường kỳ kích hoạt ( 6-16 giờ ) trong lúc, phân bố TNF hoặc IFNγ tế bào tỉ lệ cùng gien biểu đạt trình độ tùy thời gian chuyển dời mà gia tăng. Hơn nữa, biểu đạt IL-2 mRNA tế bào tỉ lệ có điều gia tăng, phân bố IL-2 tế bào tỉ lệ bảo trì tương đối ổn định.

Đồ 丨 TRAPS-seq có thể đối đơn tế bào protein phân bố, biểu hình cùng sang băng tổ tiến hành tổng hợp phân tích ( nơi phát ra: Nature Methods )

Nói tóm lại, TRAPS-seq đem đơn tế bào công năng lòng trắng trứng phân bố gia nhập đến nhiều tổ học kỹ thuật trung, có thể vì công năng tính tế bào phát hiện cung cấp trực tiếp nhất chứng cứ, tiến tới làm cơ sở nghiên cứu cùng ứng dụng nghiên cứu cung cấp tốt đẹp ý nghĩ cùng phương án giải quyết.

“Chúng ta có thể dùng nên phương pháp phát hiện một ít công năng tính siêu cấp tế bào, hay là là công năng hỗn loạn khuyết tật tế bào, để tránh dịch điều tiết hoặc tế bào miễn dịch trị liệu chờ lĩnh vực mang đến nghiên cứu cùng ứng dụng giá trị.” Singapore quốc lập đại học hậu tiến sĩ Ngô cùng kim tỏ vẻ.

Đồ 丨 tương quan luận văn ( nơi phát ra: Nature Methods )

2023 năm 4 nguyệt 10 ngày, tương quan luận văn lấy 《 thông qua trắc tự đối đơn tế bào protein phân bố thời gian phân biệt đánh giá 》 ( Time-resolved assessment of single-cell protein secretion by sequencing ) vì đề ởNature MethodsThượng phát biểu [1].

Ngô cùng kim vì nên luận văn đệ nhất tác giả, Singapore quốc lập đại học tào lập phong ( Cheow Lih Feng ) trợ lý giáo thụ đảm nhiệm luận văn thông tin tác giả.

( nơi phát ra: Technology Innovations for Systems Biology, https://sites.google /site/cheowlflab )

Như trên theo như lời, nên nghiên cứu lớn nhất lượng điểm là thông qua trắc tự đối đơn tế bào protein phân bố tiến hành thời gian phân biệt đánh giá. Này trong đó bao hàm ba cái mấu chốt vấn đề.

Đệ nhất là như thế nào làm protein nhưng trắc tự. Nói như vậy, cao thông lượng trắc tự ( Next Generation Sequencing ) trắc chính là DNA, RNA chờ acid nucleic danh sách, mà đối protein tiến hành kiểm tra đo lường, thông thường muốn ở sử dụng ánh huỳnh quang kháng thể cơ sở thượng, thông qua ánh huỳnh quang kính hiển vi cùng lưu thức tế bào phân tích kỹ thuật tiến hành. Như vậy, nếu muốn thực hiện protein nhưng trắc tự, yêu cầu đem ánh huỳnh quang kháng thể biến thành DNA đánh dấu kháng thể, cũng đối này tiến hành phân tích định tính, như vậy là có thể chọn dùng trắc tự phương thức, đọc lấy cùng phân tích protein phân bố.

Đệ nhị là như thế nào ở đơn tế bào trình độ thượng, đem phân bố lòng trắng trứng cùng phân bố chúng nó tế bào liên hệ lên. Ở phương diện này, nên đoàn đội ở mỗi cái tế bào mặt ngoài tân trang một ít trảo lấy phân bố lòng trắng trứng “Bắt tay”, để bắt lấy phân bố ra tế bào ước số, sau đó lại thông qua DNA đánh dấu kháng thể đối này tiến hành trực tiếp phân biệt.

Đệ tam là như thế nào đạt tới thời gian phân biệt. “Muốn thực hiện thời gian phân biệt chủ yếu có hai loại phương pháp, một loại là ở bất đồng thời gian điểm phân tích bất đồng hàng mẫu, thông qua trắc tự được đến số liệu lúc sau lại tiến hành nghĩ khi tự phân tích ( Pseudotime analysis ), nhưng như vậy cũng không thể chân chính mà phản ứng một tế bào ở cái này thời gian điểm cùng sau thời gian điểm tế bào phân bố tình huống biến hóa.” Ngô cùng kim giải thích nói.

Nghiên cứu nhân viên trước thông qua dùng đại biểu bất đồng thời gian điểm DNA nhãn đánh dấu tương ứng kiểm tra đo lường kháng thể, sau đó ở hai cái bất đồng thời gian điểm hạ đối này tiến hành kiểm tra đo lường, cuối cùng thông qua số liệu phân tích khác nhau ra hai cái thời gian điểm, như vậy có thể thực hiện chân chính thời gian phân biệt đồ.

Tại đây hạng nghiên cứu trung, nên đoàn đội chỉ nghiên cứu ba cái công năng tính tế bào ước số. Mà bởi vì tế bào gian sai biệt tính rất lớn, rất nhiều tế bào đều có thể phân bố nhiều loại tế bào ước số, bởi vậy kế tiếp bọn họ tưởng nếm thử đề cao nên phương pháp tính chất phức tạp, thực hiện đối mười cái thậm chí mấy chục cái phân bố lòng trắng trứng đồng thời kiểm tra đo lường, cuối cùng đẩy mạnh cái này kỹ thuật ở càng vì rộng khắp lĩnh vực đạt được ứng dụng.

Tham khảo tư liệu:

1. Wu, T., Womersley, H.J., Wang, J.R. et al. Time-resolved assessment of single-cell protein secretion by sequencing.Nature Methods20, 723–734 (2023). https://doi.org/10.1038/s41592-023-01841-y