Báo cáo cơ nhân thị nhất cáPhân tử sinh vật họcKhái niệm, tha thị chỉ nhất loại tại tế bào, tổ chức / khí quan hoặc cá thể xử vu đặc định tình huống hạ hội biểu đạt tịnh sử đắc tha môn sản sinh dịch vu kiểm trắc, thảThật nghiệm tài liêuNguyên bổn bất hội sản sinh đích tính trạng đích cơ nhân. Tác vi báo cáo cơ nhân, tại di truyện tuyển trạch hòa si tuyển kiểm trắc phương diện tất tu cụ hữu dĩ hạ kỉ cá điều kiện: ① dĩ bị khắc long hòa toàn tự liệt dĩ trắc định; ② biểu đạt sản vật tạiThụ thể tế bàoTrung bổn bất tồn tại, tức vô bối cảnh, tại bị chuyển nhiễm đích tế bào trung vô tương tự đíchNội nguyên tínhBiểu đạt sản vật; ③ kỳ biểu đạt sản vật năng tiến hành định lượng trắc định.[1]
- Trung văn danh
- Báo cáo cơ nhân
- Ngoại văn danh
- Reporter Gene
- Biệt danh
- Báo đạo cơ nhân[2]
- Hàm nghĩa
- Dịch vu bị kiểm trắc đích tính trạng đích cơ nhân
- Đặc chinh
- Bị khắc long hòa toàn tự liệt dĩ trắc định đẳng
- Ứng dụng
- Thực vật cơ nhân công trình đẳng
- Liệt cử
- Lục môi tố ất tiên cơ chuyển di môi ( CAT ) đẳng
- Dung hợp hình thành
- Biên mã hòa cơ nhân biểu đạt điều tiết tự liệt tương dung hợp
Tác vi báo cáo cơ nhân, tại di truyện tuyển trạch hòa si tuyển kiểm trắc phương diện tất tu cụ hữu dĩ hạ kỉ cá điều kiện:
( 1 ) dĩ bị khắc long hòa toàn tự liệt dĩ trắc định;
( 2 ) biểu đạt sản vật tạiThụ thể tế bàoTrung bổn bất tồn tại, tức vô bối cảnh, tại bị chuyển nhiễm đích tế bào trung vô tương tự đích nội nguyên tính biểu đạt sản vật;
( 3 ) kỳ biểu đạt sản vật năng tiến hành định lượng trắc định.
Tại thực vậtCơ nhân công trìnhNghiên cứu lĩnh vực, dĩ sử dụng đích báo cáo cơ nhân hữu dĩ hạ kỉ chủng:Yên chi dảmHợp thành môiCơ nhân ( nos ), chương ngư dảm hợp thành môi cơ nhân (ocs), tân môi tố lân toan chuyển di môi cơ nhân ( nptⅡ ),Lục môi tốẤt tiênChuyển di môiCơ nhân ( cat ), khánh đại môi tố chuyển di môi cơ nhân, bồ đào đường đại môi cơ nhân, huỳnh quang môi cơ nhân đẳng. nos, ocs giá lưỡng cá cơ nhân thị trí lựuThổ nhưỡng nông can khuẩn( Agrobacterium tumfaciens ) đíchTi chất lạpĐặc hữu đích, đối Ti chất lạp tiến hành cải tạo, dụng tương ứng đích trí lựuNông can khuẩnChuyển hóa thực vật thể thời, như quảNgoại nguyên cơ nhânChuyển nhập thực vật thể trung, tắc giá lưỡng chủng báo cáo cơ nhân tại thực vậtCăn hànhDiệp trung quân năng biểu đạt, bất thụ phát dục điều khống, kiểm trắc thời trực tiếp dụngChuyển hóa thểĐề thủ dịchTiến hànhChỉ điện vịnh,Nhiễm sắc hậu tạiTử ngoại quangHạ quan sát huỳnh quang tức khả. nptⅡ, cat cậpKhánh đại môi tốChuyển di môi cơ nhân, quân vi kháng sinh tố si tuyển cơ nhân, tương quan đích môi khả dĩ đối để vật tiến hành tu sức ( lân toan hóa,Ất tiên hóaĐẳng ), tòng nhi sử giá ta kháng sinh tố thất khứ đốiThực vật sinh trườngĐíchỨc chế tác dụng,Sử đắc hàm hữu giá taKháng tính cơ nhânĐích chuyển hóa thể năng tại hàm giá ta kháng sinh tố đích si tuyểnBồi dưỡng cơThượng chính thường sinh trường, dã khả dĩ dụng chuyển hóa thể đề thủ dịch thể, ngoại dụngĐồng vị tố tiêu ký,Phóng xạ tự hiển ảnhSi tuyển chuyển hóa thể. Thường dụng đích nhất chủng báo cáo cơ nhân thị β-D- bồ đào đường đại môi cơ nhân, caiMôi thôi hóaĐể vật hình thành β-D-Bồ đào đường đại toan,Tha tại thực vật thể trung kỉ hồ vô bối cảnh,Tổ chức hóa họcKiểm trắc ngận ổn định, khả dụngPhân quangQuang phổ, huỳnh quang đẳng tiến hành kiểm trắc. Huỳnh quang môi cơ nhân ( luc ) thị 1985 niên tòngBắc mỹHuỳnh hỏa trùng hòaKhấu đầu trùngcDNA văn khốTrung khắc long xuất lai đích, cai môi tại hữuATP,Mg2+,O2HòaHuỳnh quang tốTồn tại hạ phát xuất huỳnh quang, giá dạng tựu khả dụngChuyển cơ nhân thực vậtChỉnh chu hoặc bộ phân trực tiếp dụng X-Quang phiếnHoặc chuyên môn nghi khí tiến hành kiểm trắc.
Tại động vậtCơ nhân biểu đạt điều khốngĐích nghiên cứu trung, báo cáo cơ nhân dã bị quảng phiếm ứng dụng. Thường dụng đích hữuLục môi tố ất tiên chuyển di môi cơ nhân( cat ),β- bán nhũ đường đại môiCơ nhân ( LacZ ), nhị khinh diệp toan hoàn nguyên môi cơ nhân, huỳnh quang môi cơ nhân đẳng. cat cơ nhân tác vi báo cáo cơ nhân, kiểm trắc thời khả thông quáPhóng xạ tự hiển ảnhQuan sát. Huỳnh quang môi cơ nhân tác vi báo cáo cơ nhân, cụ hữu kiểm trắc tốc độ khoái, linh mẫn độ bỉ cat cơ nhân cao 30～1000 bội, phí dụng đê, bất nhu sử dụngPhóng xạ tính đồng vị tốĐẳng ưu điểm, đắc đáo liễu quảng phiếm đích thải dụng.
Khả thông quá báo cáo cơ nhân đích biểu đạt, nghiên cứuĐản bạch chấtDữ đản bạch chất chi gian đích tương hỗ tác dụng.Song tạp giao thể hệThị do báo cáoCơ nhân chuyển lụcĐiều khống khu,Báo cáo cơ nhân cập nhất đối khả dĩ tương hỗ tác dụng đích tạp hợpPhản thức tác dụng nhân tửTổ thành. Lai tòng thượng thuật tạp giao thể hệ trung phát triển xuất đích đan nhất tạp giao thể hệ kỹ thuật, dã thị căn cư báo cáoCơ nhân biểu đạtLượng đích kiểm trắc si tuyển xuất dữ dĩ triThuận thức tác dụng nguyên kiệnTương kết hợp đích vị tri nhân tử đích DNA, cai hạng kỹ thuật chính quảng phiếm ứng dụng vu khắc long tế bào trung hàm lượng vi nhược thả dụng sinh hóa thủ đoạn nan dĩ thuần hóa đích phản thức tác dụng nhân tử.
Do thử khả tri, báo cáo cơ nhân tạiCơ nhân biểu đạt điều khốngHòaCơ nhân công trìnhNghiên cứu trung xử vu phi thường trọng yếu đích địa vị, tha thị tác viNgoại nguyênMục đích cơ nhânNăng phủ chuyển hóa thực vật thể đích tham lộ tiên phong nhi thủ tiên bị nghiên cứu đích, tại nghiên cứu thực vật đích cơ nhân biểu đạt điều khống phương diện khởi trứ trọng yếu đích tác dụng, hiện dĩ thôi quảng đáoChân hạch sinh vậtĐíchCơ nhân điều khốngLĩnh vực trung. Tùy trứ cơ nhân công trình kỹ thuật nhật tân nguyệt dị đích phát triển, báo cáo cơ nhân giá nhất tham lộ giả đích tác dụng hội canh minh hiển.
( 1 ) tối thường dụng đích báo cáo cơ nhân đại đa thị biên mãKháng sinh tố kháng tínhĐản bạch đích cơ nhân, thông quá kiểm tra sản vật thị phủ cụ hữu kháng sinh tố đích kháng tính lai xác định cơ nhân đích biểu đạt tình huống.
( 2 )Lục môi tốẤt tiênCơ chuyển di môi ( CAT ): Cai báo cáo cơ nhân lai nguyên vuĐại tràng can khuẩnChuyển vị tử9, thị đệ 1 cá dụng vuKiểm trắc tế bàoNội chuyển lục hoạt tính đích báo cáo cơ nhân. Lục môi tố ất tiên cơ chuyển di môi khả thôi hóa ất tiên CoA đích ất tiên cơ chuyển di đáo lục môi tố 3 thưởng cơ, nhi sử lục môi tố giải độc. CAT tại bộ nhũ tế bào vô nội nguyên tính biểu đạt, tính chất ổn định,Bán suy kỳGiác đoản, thích vuThuấn thời biểu đạtNghiên cứu. Khả dụngĐồng vị tố,Huỳnh quang tốHòaMôi liên miễn dịch hấp phụ trắc định(enzyme—linked immunosorbant assay,ELISA) kiểm trắc kỳ hoạt tính, dã khả tiến hànhĐản bạch chất ấn tích( Western blotting ) hòaMiễn dịch tổ chức hóa họcPhân tích. CAT dữ kỳ tha báo cáo cơ nhân tương bỉ,Tuyến tính phạm viGiác trách,Linh mẫn tínhGiác đê.
( 3 )β bán nhũ đường đại môi:βBán nhũ đường đạiMôi do đại tràng can khuẩn lacZ cơ nhân biên mã, khả thôi hóa bán nhũĐường đạiThủy giải. Tối đại ưu thế thị dịch vu dụngMiễn dịch tổ chức hóa học phápQuan trắc kỳ nguyên vị biểu đạt, thị tối thường dụng đích giam trắcChuyển nhiễm suấtĐíchBáo đạo cơ nhânChi nhất. Dĩ lân —Tiêu cơ bổn—β—D— bán nhũTi namĐường đại ( ONPG ) vi để vật khả dụng tiêu chuẩn đíchBỉ sắc phápKiểm trắcMôi hoạt tính,Kỳ kiểm trắc động lực học phạm vi vi 6 cáSổ lượng cấp.Lục phân hồng—β—D— bán nhũ ti nam đường đại ( CPRG ) thị lánh nhất cá khả dụng bỉ sắc pháp kiểm trắc môi hoạt tính đích để vật, kỳ linh mẫn độ bỉ ONPG cao cận 10 bội. Dĩ MUG hòaHuỳnh quang tốNhị bán nhũ đường đại ( FDG ) vi để vật tắc khả dụng huỳnh quang pháp kiểm trắc kỳ hoạt tính. Thử pháp khả kiểm trắc đan cá tế bào đích môi hoạt tính, tịnh khả dụng vu lưu thức tế bào học (FACS) phân tích. Như dĩ nhị dưỡng tạp hoàn đinh hoàn vi để vật, khả dụngHóa học phát quang phápKiểm trắc môi hoạt tính, kỳ kiểm trắc động lực học phạm vi tối đại, linh mẫn độ tối cao, dữ dụngSinh vật phát quangPháp kiểm trắcHuỳnh quang tố môiHoạt tính đích linh mẫn độ tương tự.
( 4 ) huỳnh quang tố môi: Huỳnh quang tố môi thị năng cú thôi hóa bất đồng để vậtDưỡng hóa phát quangĐích nhất loại môi, bộ nhũ tế bào vô nội nguyên tính huỳnh quang tố môi. Tối thường dụng đích huỳnh quang tố môi hữu tế khuẩn huỳnh quang tố môi,Huỳnh hỏa trùngHuỳnh quang tố môi hòa Renilla huỳnh quang tố môi. Tế khuẩn huỳnh quang tố môi đối nhiệt mẫn cảm, nhân thử tại bộ nhũ tế bào đích ứng dụng trung thụ đáo hạn chế. Huỳnh hỏa trùng huỳnh quang tố môi linh mẫn độ cao, kiểm trắc tuyến tính phạm vi khoan đạt 7～8 cá sổ lượng cấp, thị tối thường dụng vu bộ nhũ tế bào đíchBáo đạo cơ nhân,Dụng huỳnh quangBỉ sắc kếTức khả kiểm trắc môi hoạt tính, nhân nhi thích dụng vuCao thông lượng si tuyển.Tùy trứ cụ hữuMô thông thấu tínhHòa quang liệt giải tác dụng đích huỳnh hỏa trùng huỳnh quang tố môi đích ứng dụng, vô nhu liệt giải tế bào tức khả kiểm trắc môi hoạt tính. Renilla huỳnh quang tố môi thôi hóa tràng khang tố ( coelenterazine ) dưỡng hóa, sản vật khả thấu quáSinh vật mô,Khả năng thị tối thích dụng vuHoạt tế bàoĐích báo cáo phân tử. TươngHuỳnh quang tố môi báo cáo cơ nhânTái thể chuyển nhiễm đáo tế bào trung, khả dụng huỳnh quang tố môiKiểm trắc hệ thốngLinh mẫn phương tiện địa trắc định huỳnh quang tố môi cơ nhân đích biểu đạt. Tự 1986 niên khởi, huỳnh hỏa trùngHuỳnh quang tố môiCơ nhân bị dụng tác trắc địnhCơ nhân biểu đạtĐích báo cáo cơ nhân, hoạch đắc liễu quảng phiếm đích ứng dụng. Promega công tư đích pGL3 cập pGL2 hệ liệt tái thể, hàmSV40Khải động tửCậpTăng cường tửĐích bất đồng tổ hợp, hữu trợ vu phân tích DNA phiến đoạn đích chuyển lục hoạt tính.
Huỳnh quang tố môi báo cáo cơ nhânHữu hứa đa ưu điểm: ① phiPhóng xạ tính;② bỉ CAT cập kỳ tha báo cáo cơ nhân tốc độ khoái; ③ bỉ CAT linh mẫn 100 bội; ④ huỳnh quang tố môi tại bộ nhũ tế bào trung đích bán suy kỳ vi 3 tiểu thời, tại thực vật trung đích bán suy kỳ vi 3.5 tiểu thời. Do vu bán suy kỳ đoản, cố khải động tử đích cải biến hội tức thời đạo trí huỳnh quang tố môi hoạt tính đích cải biến, nhi huỳnh quang tố môi bất hội tích luy. Tương phản, CAT tại bộ nhũ tế bào trung đích bán suy kỳ vi 50 tiểu thời.Huỳnh quang tố môiNùng độ tại 10—16mol/L( 10pS/L ) đáo 10-8mol/L ( 1mg/L ) phạm vi nội, huỳnh quangTín hào cường độDữ môi nùng độ thành chính bỉ. Tại lý tưởng điều kiện hạ, khả kiểm trắc đáo l0-20mol/L đích huỳnh quang tố môi. Promega công tư đích huỳnh quang tố môi kiểm trắc hệ thống bỉ nhất bàn đích phương pháp linh mẫn cập giản đan, sản sinh đích quang ổn định.
( 5 ) phân tiết hìnhDảm tính lân toan môi( SEAP ): SEAP thị nhânThai bànDảm tính lân toan môi đích đột biến thể, vô nội nguyên tính biểu đạt. SEAP khuyết phạp thai bàn dảm tính lân toan môiThoa cơ mạt đoanĐích 24 cáAn cơ toan.Kỳ ưu điểm thị vô nhu liệt giải tế bào, chỉ dụng bồi dưỡng giới chất tức khả kiểm trắc môi hoạt tính, tiện vu tiến hành thời hiệu phản ứng thí nghiệm. Dĩ gian tiêu cơ bổnLân toan diêm(PNPP) vi để vật thời khả dụng tiêu chuẩn đích bỉ sắc pháp trắc định môi hoạt tính, thao tác giản đan,Phản ứng thời gianĐoản, giới cách liêm giới, đãn linh mẫn độ đê. DĩHoàng tố tuyến phiêu lánh nhị hạch đại toanLân toan vi để vật tiến hànhBỉ sắc trắc định,Kỳ linh mẫn độ tăng cao. SEAP khả thôi hóa D—Huỳnh quang tố—O— lân toan diêm thủy giải sinh thành D— huỳnh quang tố, hậu giả hựu khả tác viHuỳnh quang tố môiĐích để vật, thử tức lưỡng bộ sinh vật phát quang pháp kiểm trắc môi hoạt tính đích nguyên lý. Thử phương pháp linh mẫn độ cao, tiếp cận vuHuỳnh quang tố môi báo cáo cơ nhânĐích kiểm trắc. Hoàn khả dụng nhất bộHóa học phát quang phápKiểm trắc môi hoạt tính.
( 6 )Huỳnh quang đản bạchGia tộc:Huỳnh quang đản bạch gia tộcThị tòngThủy tức cươngHòaSan hôLoại động vật trung phát hiện đíchTương đối phân tử chất lượngVi 20 000～30 000 đíchĐồng nguyên đản bạch.Lục sắc huỳnh quang đản bạch( GFP ) thị ứng dụng tối đa đích phát quang đản bạch. GFP tồn tại vu phát quang thủy mẫu ( Aequorea Victoria ) trung. Dụng 395 Bin đíchTử ngoại tuyếnHòa 475 nm đích lam quang kích phát, GFP khả tại 508nm xử tự hành phát xạ lục sắc huỳnh quang, vô nhuPhụ trợ nhân tửHòa để vật. GFP tối đại đích ưu thế thị vô nhu tổn thương tế bào tức khả nghiên cứu tế bào nội sự kiện. 1991 niên khắc long liễu GFP cơ nhân, dĩ hoạch đắc kỉ cá đột biến thể, như “Hồng sắc thiên di” đột biến thể ( red—shiftmutant ), kỳ huỳnh quang canh cường. Kỳ tha đột biến thể hoàn hữu lam sắc huỳnh quang đản bạch ( BFP ), tăng cường hình GFP (EGFP) hòa khứ ổn định EGFP ( destabilized EGFP ) đẳng. Hồng sắcHuỳnh quang đản bạch( RFP ) thị tòng san hô ( Discosoma sp． ) trung phân ly đích phát quang đản bạch ( drFP583 hoặc DsRed ), khả phát xạ minh lượng đích hồng sắc huỳnh quang. Giá ta thường dụng đích báo cáo cơ nhân dã khả bị liên hợp ứng dụng, đồng thời kiểm trắc 2 cá thậm chí 3 cá cơ nhân đích biểu đạt. Báo cáo cơ nhân đích tuyển trạch y lại vu kỳ linh mẫn tính, khả kháo tính cập giam trắc đích động lực học phạm vi. Ổn định tính hảo đích báo cáo cơ nhân thích vuCơ nhân chuyển lụcĐộng lực học nghiên cứu hòaCao thông lượng si tuyển,Vưu kỳ thích dụng vuCơ nhân chuyển diĐíchĐịnh tính nghiên cứu.
