Neutralisationstest

DerNeutralisationstest(NT) ist eine Variante desPlaque-Assays,mit demneutralisierende Antikörpergegen bestimmteVirenimSerumeinesPatientenoder einesImpflingsnachgewiesen werden können.

Prinzip

Durch Bindung vonAntikörpernan die Oberfläche des Virus wird dessen Aufnahme in dieZelleverhindert, so dass es zu keiner Vermehrung mehr kommen kann und die Anzahl anPlaquesin einerZellkulturreduziert wird. Daher bezeichnet man den Neutralisationstest auch alsPlaque-Reduktions-Assay.

Neutralisierende Antikörper sind Antikörper, welche die Aufnahme eines Virus in eine Zelle blockieren können. Konzentrationsabhängig werden durch die neutralisierenden Antikörper alle Stellen blockiert, die an Zellen binden. Im Neutralisationstest werden nur neutralisierende Antikörper erfasst. Neutralisierende Antikörper, die gegen mehrere Virusstämme wirken, werden alsbreitneutralisierende Antikörperbezeichnet, z. B.breitneutralisierende Anti-HIV-Antikörperoderbreitneutralisierende Anti-IAV-Antikörper,und können ebenso im Neutralisationstest gemessen werden.

Der Neutralisationstest kann auch zurKonzentrationsbestimmungvonZellgiften(darunter verschiedeneToxineunterschiedlichen Ursprungs) verwendet werden, gegen die funktionshemmende Antikörper gebildet werden.

Ablauf

Eine bekannte Menge anVirionenwird zu einer Zellkultur gegeben. Es kommt auf Grund deszytopathischen Effektsdes Virus zu einer Zellzerstörung. In weiteren Ansätzen werden Viren und Patientenserum oderVerdünnungendavon zur Zellkultur gegeben. Sind im Serum ausreichend neutralisierende Antikörper gegen dieses Virus vorhanden, so wird der zytopathische Effekt vermindert und die Zellen der Kultur bleiben intakt. Wie beim Plaque-Assay werden die abgelösten Stellen des Zellrasens in Zellkultur gezählt. Zur Bestimmung desAntikörpertiterswird das Patientenserum in unterschiedlichen Kulturen mehr und mehr verdünnt (1:2, 1:4, 1:8 usw.). Als Titer wird die letzte Verdünnung bezeichnet, bei der mehr als 50 % des Zellrasens erhalten bleibt.

Stellenwert in der medizinischen Routine

Der Neutralisationstest ist ein sehr aufwändiges und langwieriges Verfahren, da Geräte für eine Zellkultur benötigt werden und der Test üblicherweise mehrere Tage dauert. Weiterhin bestehen beipathogenenViren erhöhte Anforderungen an dieSicherheitsstufe des Labors,da mit nativem Virus gearbeitet wird. Ebenso erfordern Zellkulturen ein weitaus größeres Maß an Arbeitsaufwand und Erfahrung als die Nutzung vorgefertigter Test-Kits.

DieSpezifitätder Neutralisationsreaktion wird jedoch von keinem automatisiertenImmunassayerreicht, weshalb der NT vielfach als Referenztest für dieQualitätskontrolleverwendet wird. Bei der Suche nach neutralisierenden Antikörpern ist der Neutralisationstest alternativlos.

Literatur

• H. Hof, R. Dörries:Medizinische Mikrobiologie,3. Auflage Stuttgart 2005,ISBN 3-13-125313-4,S. 42f.