Prueba del indol

Laprueba del indoles unaprueba bioquímicarealizada enespeciesbacterianaspara determinar la habilidad delorganismode romper elindoldelaminoácidotriptófano.Esta divisiónmoleculares lograda por una serie deenzimasintracelulares diferentes, un sistema que en conjunto se le llama con frecuenciatriptofanasa.

Se genera el indol por unadesaminaciónreductiva del triptófano via la molécula intermediaria ácido indolpirúvico. Las triptofanasas catalizan la reacción de desaminación, durante el cual se remueve el grupoamino(NH₂) de la molécula de triptófano. Los productos finales de la reacción son el indol,ácido pirúvico,amoníaco(NH₃) yenergía.Comocoenzimade la reacción se requiere alfosfato de piridoxal.

Procedimiento

Tal como ocurre con muchas pruebas bioquímicas, los resultados de una prueba de indol se indican con el cambio de color que sigue a la reacción. El cultivo bacteriano puro debe ser sembrado en un caldo con triptofano o peptona estériles o ambos por 24 a 48 horas antes de realizar la prueba. Luego de la incubación, se añaden cinco gotas de reactivo de Kovacs para indol (alcohol isoamílico,p-dimetilaminobenzaldehído yácido clorhídricoconcentrado) al caldo del cultivo.

Una variante de la prueba se realiza usando el reactivo de Ehrlich (usandoalcohol etílicoen lugar del alcohol isoamilo, desarrollado porPaul Ehrlich), en especial si se tiene un organismo que no sea fermentador y enorganismo anaeróbico.

Este reactivo lleva el mismo nombre que el reactivo para la prueba de oxidasa, aunque no debe confundirse, ya que su formulación química es totalmente diferente, por ello se diferencian haciendo mención a la prueba para la que son utilizados, como reactivo de Kovacs para oxidasa (diclorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina) y reactivo de Kovacs para indol (alcohol isoamílico, p-dimetilaminobenzaldehído y HCl concentrado).

Los resultados positivos originananillos de Liesegangde un color rojo o rojo-violeta en la superficie de la capa de alcohol en el cultivo. Un resultado negativo se muestra amarillo. Un resultado variable puede ocurrir cuando se muestra un color anaranjado. Ello es debido a la presencia deescatol,también conocido como metil-indol o indol metilado, otro posible producto de la degradación del triptófano.

Bacterias indol positivas

Resultado positivo para prueba de Indol

Las bacterias que resultan indol positivas al romper el indol del triptófano, incluyen:

• Aeromonas hydrophila,Aeromonas punctata,
• Bacillus alvei,
• La mayoría de losCitrobacterspp.,
• Edwardsiellaspp.,
• Escherichia coli,
• Flavobacteriumspp.,
• Haemophilus influenzae,
• La mayoría de losProteusspp. (exceptoP. mirabilis),
• Klebsiella oxytoca
• Plesiomonas shigelloides,
• Pasteurella multocida,Pasteurella pneumotropica,y
• Vibriospp.
• Staphylococcus aureus

Bacterias indol negativas

Las bacterias que generan un indol negativo en esta prueba, incluyen:

• Actinobacillusspp.,
• Aeromonas salmonicida,
• Alcaligenesspp.,
• La mayoría de losBacillusspp.,
• Bordetellaspp.,
• Enterobacterspp.,
• La mayoría de losHaemophilusspp.,
• La mayoría de losKlebsiellaspp.,
• Neisseriaspp.,
• Pasteurella haemolytica,Pasteurella ureae,
• Proteus mirabilis,
• Pseudomonasspp.,
• Salmonellaspp.,
• Serratiaspp.,
• Yersiniaspp.
• Cedeceaspp.
• Clostridium perfringens

Referencias

• MacFaddin, Jean F. "Biochemical Tests for Indentification of Medical Bacteria." Williams & Wilkins, 1980, pp 173 - 183.
• Ejemplo de una reacción típica de indol

• Datos:Q1465700