Gram positif
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LesbactériesàGram positifsont mises en évidence par une technique decolorationappeléecoloration de Gram.Cette technique de coloration, qui permet de classifier les bactéries dans deux catégories générales, repose sur les caractéristiquesmembranaireset deparoide la bactérie. Les bactéries à Gram positif apparaissent alors mauves aumicroscope.La coloration au Gram est un facteur déterminant dans lataxonomie(classification) bactérienne.
Principe de coloration des Gram positif
[modifier|modifier le code]Après fixation desbactériessur une lame (deux méthodes possibles, par fixation à l'éthanolà 90° ou par passage de la lame dans la flamme):
- la lame est plongée dans un premier colorant, leviolet de gentiane(ou un produit proche, lecristal violet). Le violet de gentiane est un colorant puissant (maistoxiqueetcancérigène). Il traverse lesparoiset lesmembranesdes bactéries et se fixe dans leurcytoplasme.Ainsi, à cette étape, toutes lescellulessont colorées en violet;
- la lame est ensuite traitée aulugol iodo-ioduréen solution qui sert de mordant. Le lugol renforce le violet de gentiane contenu dans lecytoplasmedes bactéries;
- on chasse ensuite le violet avec une solution d'éthanol,qui détermine quelles bactéries sont àGram négatifou à Gram positif. Le principe est le suivant: les bactéries à Gram positif pos sắc dent une paroi riche enpeptidoglycane,composant qui empêche l'alcool d'emporter le violet de gentiane, qui reste donc dans le cytoplasme: la bactérie n'est pas décolorée (pour plus d'information, voir ci-dessous la sectionCaractéristiques des bactéries Gram-positif);
- la lame est rincée puis plongée brièvement dans un deuxième colorant, lafuchsine.Les bactéries colorées en violet sont dites « Gram pos » et celles colorées en rose « Gram neg »;
- la lame est ensuite récupérée, rincée et séchée, puis observée aumicroscope optique,généralement à l'objectif x100 + huile à immersion. Les bactéries à Gram positif apparaissent en violet. L'observation des couleurs est généralement accompagnée de descriptions structurelles (exemple:bacilleoucoque).
Caractéristiques des bactéries Gram positif
[modifier|modifier le code]Description de l'enveloppe
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Les bactéries Gram positif ont (sauf exception) une structureunimembranéequi s'organise en trois grandes parties (de l'extérieur vers l'intérieur):
- la couche depeptidoglycanecomposant la paroi cellulaire;
- l'espace périplasmique;
- la membrane plasmique.
La couche depeptidoglycanedes bactéries à Gram positif est très épaisse contrairement à celle des bactéries àGram négatif.Sa composition varie très légèrement en fonction du genre, voire de l’espèce, de la bactérie concernée. Elle est principalement formée de plusieurs couches de polymère deN-acétyl-glucosamine(NAG) et d'acide N-acétylmuramique(NAM) en série alternée. Le peptidoglycane des Gram positif est traversé latéralement par de grandes chaînes polymériques qui le relie à la membrane plasmique: les acides lipotéichoïques. D’autres chaînes, telles les acides téichoïques, sont contenues dans le peptidoglycane et assurent sa stabilité.
L'espace périplasmique, beaucoup plus étroit que chez lesGram négatif,est un espace de stockage d'enzymes,denutriments,deprotéines,d’ions... Il a beaucoup d'autres fonctions notamment dans certaines étapes de lasynthèse de protéineet dans lemétabolisme.Il se situe entre la couche depeptidoglycaneet la membrane plasmique.
La membrane pos sắc de des protéines poreuses aboutissant dans l'espace périplasmique (synthèse de protéine). La membrane plasmique contient de nombreux autres complexes protéiques d'une importance vitale pour la bactérie (comme l'ATPsynthase) qui ont des rôles prépondérants dans le métabolisme bactérien.
Description des souches
[modifier|modifier le code]Les bactéries Gram positif sont pour la plupart des germes non exigeants, c'est-à-dire qu'ils se cultivent facilement dans les milieux de base. La plupart descoquessont des Gram positif mais de nombreuxbacillessont aussi des Gram positif.
Exceptions
[modifier|modifier le code]Malgré l'absence de paroi depeptidoglycane,lesmycoplasmesappartiennent au groupe des Gram+. Ce groupe bactérien sera par conséquent coloré comme lesGram-.
Exemples de bactéries Gram positif
[modifier|modifier le code]- GenreStaphylococcus
- GenreMicrococcus
- GenreLactococcus
- GenreLactobacillus
- GenreClostridium
- GenreBacillus
- GenreStreptococcus
- GenreEnterococcus
- GenreListeria
La discrimination entre les bactéries à Gram positif se fait par la recherche de lacatalase.
Recherche de la catalase
[modifier|modifier le code]Réalisation
[modifier|modifier le code]Sur une lame microscopique propre, déposer une goutte d'eau oxygénée (ouperoxyde d'hydrogèneH2O2). Prélever sur un milieugélosé,la colonie à tester au moyen d'unepipette Pasteurstérile ou d'un ensemenceur métallique (attention le fer peut donner aussi une catalase positive) et déposer la colonie dans la goutte.
Observations et conclusions
[modifier|modifier le code]Si on observe un dégagement gazeux (dioxygène), on dit que le résultat est positif, la souche est catalase +. Si on n'observe aucun dégagement gazeux, on dit que le résultat est négatif, la souche est catalase -.
Voir aussi
[modifier|modifier le code]Articles connexes
[modifier|modifier le code]- Posibacteria
- Gram négatif
- Leslevures:apparaissent violettes à la coloration de Gram mais on ne peut pas dire pour autant qu'elles soient Gram positif car elles n’ont pas du tout les mêmes caractéristiques d’enveloppe.
- Lesmycobactériesconstituent une exception, car elles ne sont pas colorables par la coloration de Gram: on les désigne commeacido-alcoolo-résistantes.Voircoloration de Ziehl-Neelsen.
