Tác vi sinh mệnh hoạt động đích chủ yếu thừa đam giả, đản bạch chất đích công năng nhất trực thị khoa nghiên hoạt động trung bị thụ quan chú đích minh tinh. Đản bạch chất thông thường bất thị “Đan đả độc đấu” đích, tuyệt đại đa sổ đích công năng đản bạch chất hội dữ kỳ tha đản bạch chất tương hỗ tác dụng, nhất khởi điều khống sinh mệnh quá trình. Na ma, nghiên cứu đản bạch chất hỗ tác đích kỹ thuật, nhĩ liễu giải đa thiếu ni?
Nhất, miễn dịch cộng trầm điến
Miễn dịch cộng trầm điến (Co-Immunoprecipitation,COIP) kỹ thuật thị lợi dụng kháng nguyên kháng thể chi gian cụ hữu đặc dị đích miễn dịch kết hợp đích nguyên lý, tại tế bào liệt giải dịch trung gia nhập đặc dị tính kháng thể, tương kháng nguyên cập dữ kháng nguyên kết hợp đích đản bạch trầm điến hạ lai. Miễn dịch phục hợp vật khả dĩ thông quá Western Blot đích phương pháp nghiệm chứng kháng nguyên hòa kỳ tha đản bạch chi gian đích tương hỗ tác dụng, dã khả dĩ dụng chất phổ đích phương pháp, kiểm trắc kháng nguyên đích kết hợp đản bạch thành viên.
Miễn dịch cộng trầm điến
COIP kỹ thuật đích ưu khuyết điểm:
Ưu điểm:
(1) đắc đáo đích hỗ tác đản bạch thị tế bào nội dữ dụ nhị đản bạch thiên nhiên hỗ tác đích, phù hợp thể nội chân thật sinh lý tình huống;
(2) thật nghiệm điều kiện ôn hòa, khả tị miễn nhân vi đích ảnh hưởng;(3) khả phân ly đắc đáo thiên nhiên trạng thái đích tương hỗ tác dụng đản bạch phục hợp vật.
Khuyết điểm:
(1) bất thích dụng vu kết hợp lực nhược hoặc giả thuấn gian kết hợp đích đản bạch hỗ tác nghiên cứu.
Nhị, Pull Down
Pull-down kỹ thuật dụng cố tương hóa đích, dĩ tiêu ký đích nhị đản bạch hoặc tiêu thiêm đản bạch ( sinh vật tố -, PolyHis- hoặc GST-), tòng tế bào liệt giải dịch trung điếu xuất dữ chi tương hỗ tác dụng đích đản bạch. Thông quá Pull-down kỹ thuật khả dĩ xác định dĩ tri đích đản bạch dữ điếu xuất đản bạch hoặc dĩ thuần hóa đích tương quan đản bạch gian đích tương hỗ tác dụng quan hệ, tòng thể ngoại truyện lộ hoặc phiên dịch thể hệ trung kiểm trắc xuất đản bạch tương hỗ tác dụng quan hệ. COIP kiểm trắc đáo đích đản bạch hỗ tác quan hệ khả năng thị đệ tam cá đản bạch tác vi kiều lương kiến lập đích, dữ chi tương bỉ,pull down kỹ thuật khả dụng vu kiểm trắc đản bạch chi gian đích trực tiếp hỗ tác quan hệ. Đãn pull down nhu yếu tiên bả dụ nhị đản bạch nguyên hạch biểu đạt thuần hóa xuất lai, tái dữ mục đích đản bạch dung dịch phu dục, kỳ vô pháp tượng COIP nhất dạng mô nghĩ tế bào nội thiên nhiên đích hỗ tác hoàn cảnh.
Pull-down kỹ thuật
Tam, song phân tử huỳnh quang hỗ bổ
Song phân tử huỳnh quang hỗ bổ kỹ thuật thị chỉ huỳnh quang đản bạch đa thái liên tại mỗ ta bất bảo thủ đích an cơ toan xử thiết khai, hình thành bất phát huỳnh quang đích N- hòa C- mạt đoan 2 cá đa thái phiến đoạn. Tương giá 2 cá huỳnh quang đản bạch phiến đoạn phân biệt liên tiếp đáo 1 đối năng phát sinh tương hỗ tác dụng đích mục tiêu đản bạch thượng, tại tế bào nội cộng biểu đạt hoặc thể ngoại hỗn hợp giá 2 cá dung hợp đản bạch thời, do vu mục tiêu đản bạch chất đích tương hỗ tác dụng, huỳnh quang đản bạch đích 2 cá phiến đoạn tại không gian thượng hỗ tương kháo cận hỗ bổ, trọng tân cấu kiến thành hoàn chỉnh đích cụ hữu hoạt tính đích huỳnh quang đản bạch phân tử, tòng nhi sản sinh huỳnh quang. Khả thị hóa thị BiFC kỹ thuật tối đại đích đặc điểm.
Song phân tử huỳnh quang hỗ bổ
Tứ, diếu mẫu song tạp giao
Diếu mẫu song tạp giao hệ thống thị đương tiền quảng phiếm dụng vu đản bạch chất tương hỗ tác dụng tổ học nghiên cứu đích nhất chủng trọng yếu phương pháp. Kỳ nguyên lý thị đương bá đản bạch hòa dụ nhị đản bạch đặc dị kết hợp hậu, dụ nhị đản bạch kết hợp vu báo đạo cơ nhân đích khải động tử, khải động báo đạo cơ nhân tại diếu mẫu tế bào nội đích biểu đạt, như quả kiểm trắc đáo báo đạo cơ nhân đích biểu đạt sản vật, tắc thuyết minh lưỡng giả chi gian hữu tương hỗ tác dụng, phản chi tắc lưỡng giả chi gian một hữu tương hỗ tác dụng. Tại thật tế công tác trung, nhân môn căn cư nhu yếu phát triển liễu đan tạp giao hệ thống, tam tạp giao hệ thống hòa phản hướng tạp giao hệ thống đẳng.
Trừ thử chi ngoại, nghiên cứu đản bạch chất hỗ tác đích phương pháp hoàn hữu phệ nhân thể triển kỳ kỹ thuật, đẳng ly tử cộng chấn kỹ thuật, kháng thể dữ đản bạch chất trận liệt kỹ thuật đẳng.
Hồi phục điểm tán thu tàng yêu thỉnh thảo luận quản lý
Nhất, miễn dịch cộng trầm điến
Miễn dịch cộng trầm điến (Co-Immunoprecipitation,COIP) kỹ thuật thị lợi dụng kháng nguyên kháng thể chi gian cụ hữu đặc dị đích miễn dịch kết hợp đích nguyên lý, tại tế bào liệt giải dịch trung gia nhập đặc dị tính kháng thể, tương kháng nguyên cập dữ kháng nguyên kết hợp đích đản bạch trầm điến hạ lai. Miễn dịch phục hợp vật khả dĩ thông quá Western Blot đích phương pháp nghiệm chứng kháng nguyên hòa kỳ tha đản bạch chi gian đích tương hỗ tác dụng, dã khả dĩ dụng chất phổ đích phương pháp, kiểm trắc kháng nguyên đích kết hợp đản bạch thành viên.
Miễn dịch cộng trầm điến
COIP kỹ thuật đích ưu khuyết điểm:
Ưu điểm:
(1) đắc đáo đích hỗ tác đản bạch thị tế bào nội dữ dụ nhị đản bạch thiên nhiên hỗ tác đích, phù hợp thể nội chân thật sinh lý tình huống;
(2) thật nghiệm điều kiện ôn hòa, khả tị miễn nhân vi đích ảnh hưởng;(3) khả phân ly đắc đáo thiên nhiên trạng thái đích tương hỗ tác dụng đản bạch phục hợp vật.
Khuyết điểm:
(1) bất thích dụng vu kết hợp lực nhược hoặc giả thuấn gian kết hợp đích đản bạch hỗ tác nghiên cứu.
Nhị, Pull Down
Pull-down kỹ thuật dụng cố tương hóa đích, dĩ tiêu ký đích nhị đản bạch hoặc tiêu thiêm đản bạch ( sinh vật tố -, PolyHis- hoặc GST-), tòng tế bào liệt giải dịch trung điếu xuất dữ chi tương hỗ tác dụng đích đản bạch. Thông quá Pull-down kỹ thuật khả dĩ xác định dĩ tri đích đản bạch dữ điếu xuất đản bạch hoặc dĩ thuần hóa đích tương quan đản bạch gian đích tương hỗ tác dụng quan hệ, tòng thể ngoại truyện lộ hoặc phiên dịch thể hệ trung kiểm trắc xuất đản bạch tương hỗ tác dụng quan hệ. COIP kiểm trắc đáo đích đản bạch hỗ tác quan hệ khả năng thị đệ tam cá đản bạch tác vi kiều lương kiến lập đích, dữ chi tương bỉ,pull down kỹ thuật khả dụng vu kiểm trắc đản bạch chi gian đích trực tiếp hỗ tác quan hệ. Đãn pull down nhu yếu tiên bả dụ nhị đản bạch nguyên hạch biểu đạt thuần hóa xuất lai, tái dữ mục đích đản bạch dung dịch phu dục, kỳ vô pháp tượng COIP nhất dạng mô nghĩ tế bào nội thiên nhiên đích hỗ tác hoàn cảnh.
Pull-down kỹ thuật
Tam, song phân tử huỳnh quang hỗ bổ
Song phân tử huỳnh quang hỗ bổ kỹ thuật thị chỉ huỳnh quang đản bạch đa thái liên tại mỗ ta bất bảo thủ đích an cơ toan xử thiết khai, hình thành bất phát huỳnh quang đích N- hòa C- mạt đoan 2 cá đa thái phiến đoạn. Tương giá 2 cá huỳnh quang đản bạch phiến đoạn phân biệt liên tiếp đáo 1 đối năng phát sinh tương hỗ tác dụng đích mục tiêu đản bạch thượng, tại tế bào nội cộng biểu đạt hoặc thể ngoại hỗn hợp giá 2 cá dung hợp đản bạch thời, do vu mục tiêu đản bạch chất đích tương hỗ tác dụng, huỳnh quang đản bạch đích 2 cá phiến đoạn tại không gian thượng hỗ tương kháo cận hỗ bổ, trọng tân cấu kiến thành hoàn chỉnh đích cụ hữu hoạt tính đích huỳnh quang đản bạch phân tử, tòng nhi sản sinh huỳnh quang. Khả thị hóa thị BiFC kỹ thuật tối đại đích đặc điểm.
Song phân tử huỳnh quang hỗ bổ
Tứ, diếu mẫu song tạp giao
Diếu mẫu song tạp giao hệ thống thị đương tiền quảng phiếm dụng vu đản bạch chất tương hỗ tác dụng tổ học nghiên cứu đích nhất chủng trọng yếu phương pháp. Kỳ nguyên lý thị đương bá đản bạch hòa dụ nhị đản bạch đặc dị kết hợp hậu, dụ nhị đản bạch kết hợp vu báo đạo cơ nhân đích khải động tử, khải động báo đạo cơ nhân tại diếu mẫu tế bào nội đích biểu đạt, như quả kiểm trắc đáo báo đạo cơ nhân đích biểu đạt sản vật, tắc thuyết minh lưỡng giả chi gian hữu tương hỗ tác dụng, phản chi tắc lưỡng giả chi gian một hữu tương hỗ tác dụng. Tại thật tế công tác trung, nhân môn căn cư nhu yếu phát triển liễu đan tạp giao hệ thống, tam tạp giao hệ thống hòa phản hướng tạp giao hệ thống đẳng.
Trừ thử chi ngoại, nghiên cứu đản bạch chất hỗ tác đích phương pháp hoàn hữu phệ nhân thể triển kỳ kỹ thuật, đẳng ly tử cộng chấn kỹ thuật, kháng thể dữ đản bạch chất trận liệt kỹ thuật đẳng.
Hồi phục điểm tán thu tàng yêu thỉnh thảo luận quản lý