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1如题,现在看起来真的是太落寞冷清了,要达到条件来着
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3来搞个投票?虽然好像没人理我
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0近来看到好多“熟悉”的问题,不断的被询问。猜测是因为丁香园不断的壮大,好多新的战友 不断加入。但是可能大家一时并没有养成搜索的好习惯,于是许多问题不断的被翻出。其中蛋白表达问题是问的最多的,虽然关于这个问题的帖子园子里是汗牛充栋了。建议 大家在询问之前能养成搜索的好习惯,毕竟高手们并不是时时都在的。在这里我把关于蛋白表达问题做一个总结。这里的帖子都是含有加分的回答,很有参考价值。普通的帖子没有整理。
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1蛋白吧是张艺兴和边伯贤的CP吧啊
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0IP 和Co-IP服务 免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶联的agarose或Sepharose珠子孵育,通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物,沉淀经过洗涤后,重悬于电泳上样缓冲液,煮沸5-10min,在高温及还原剂的作用下,抗原与抗体解离,离心收集上清,上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白。 免疫共沉淀(Co- Immunoprecipitation, Co-IP)是利
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0双功能分子是一种蛋白降解靶向联合体(PROTAC),制备方法成熟,通过使用连接臂将BET蛋白小分子抑制剂和E3泛素连接酶复合体中Cereblon蛋白配体连接获得双功能分子,所得化合物能够选择性诱导BET蛋白降解。BET家族蛋白包括BRD2、BRD3,BRD4以及BRDT四种亚型,BRD4被募集到靶基因的超增强子区域,c-MYC,Bc1-X1和BCL-6等基因的转录。 蛋白水解靶向嵌合体PROTAC(Proteolytic Targeting Chimera)技术,将靶向蛋白的小分子药,和E3泛素连接酶配体通过连接臂片段连接起来,同时结合于靶蛋白
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0PROTACs 作为一种双功能分子,它通过招募蛋白质水解系统降解。主要包括三个部分,一个部分是靶蛋白的结合基团,也就是靶蛋白的配体,另一部分是降解系统的“招募”单元,将两者连接到一起的连接基团,通常为烷基链或者聚乙二醇链。PROTACs利用泛素-蛋白酶体系统降解途径实现靶蛋白的降解,主要依靠该途径中的E3连接酶对靶蛋白进行泛素化修饰,然后被蛋白酶体所识别被其降解。 蛋白的两种途径降解:泛素蛋白酶体系统(ubiquitin proteasomesystem, UPS)
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0染色质免疫沉淀 染色质免疫沉淀技术的原理是:在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来。染色质免疫沉淀技术一般包括细胞固定,染色质断裂,染色质免疫沉淀,交联反应的逆转,DNA的纯化,以及DNA的鉴定。 常见问题: 1.ChIP是什么? 答:染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用
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0易科拜德 货号:EP26613 规格 :100ul, 非预染可曝光Marker 14-15KD
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0EP26616 彩色预染标准分子量蛋白Marker 分子量范围10-180KDA
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0请问甘油体系中加入表面活性剂,表面活性剂亲脂端不会与甘油结合降低甘油体系的粘稠度吗,小白求助,谢谢大佬
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1植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g 样品加入3.5ml 提取液,可根据材料不同适当加入),准 备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4 小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清夜,样品制备完成。 蛋白质提取液:300ml 1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml 2、甘油(Glycerol)75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g 这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳! 或者用三氯醋酸—丙酮沉淀法,这种方法针对双向电泳
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0染色质免疫沉淀技术的原理是:在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来。染色质免疫沉淀技术一般包括细胞固定,染色质断裂,染色质免疫沉淀,交联反应的逆转,DNA的纯化,以及DNA的鉴定。 常见问题: 1.ChIP是什么? 答:染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特
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0酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶,最后用考马斯亮蓝将凝胶染色,再脱色,在蓝色背景下可出现白色条带,条带的强弱与MMP-2和MMP-9活性成正比。 复性原理:在电泳过程中,SDS与样品中的MMPs结合(当然是可逆性结合),破坏其氢键、疏水键而使MMPs不能发挥其分解明胶的作用,而只有当将胶置Trition中洗脱(最好是放在
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000000蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现己广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。蛋白实验虽然简单,但是条带容易出现的问题极多,下面来分享一下不同条带的原因和解决办法吧。 出现不均匀的白色斑点的原因 转膜时有气泡 膜上抗体分布不均匀 解决办法 转膜前小心去除气泡 抗体0000蛋白质纯化 蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异,利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。 蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。一般蛋白纯化采用的方法为树脂法。粗分离阶段主要将目的蛋白和
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