纳米金偶联抗体/蛋白试剂盒可以通过抗体/蛋白上的伯胺基团(如赖氨酸),简单、快速地实现抗体/蛋白与纳米金的共价偶联。偶联在30 分钟内即可完成,偶联效率可达70%左右。此为通用型试剂盒,适用于各种分子量的抗体/蛋白,也适用于多肽、酶等分子。
试剂盒组成与存储
将试剂盒储存在-20⁰C。偶联剂、反应缓冲液可保存在+4℃或-20℃
实验步骤
Ø 将所有的试剂恢复至室温。
Ø 取500 μL反应缓冲溶液加入1管纳米金中,得到纳米金的分散液;取1管偶联试剂溶解于200 μL纯水中。
Ø 取100 μg抗体/蛋白加入至上一步的纳米金缓冲溶液中,在该混合溶液中,再加入100 μL偶联试剂,混匀后在室温下持续30分钟左右。(注意:偶联试剂需现配现用!)
Ø 反应结束后以9500 rpm,离心20分钟,纯水洗涤2~3次以除去未反应完的抗体/蛋白。
Ø 共轭抗体储存:标记抗体/蛋白后,我们建议将偶联物储存在 +4°C,不要将偶联物储存在 -20°C。偶联物的整体稳定性将由抗体/蛋白本身的稳定性决定,因为它会首先降解。如果您的抗体/蛋白稳定,偶联物也将稳定。
Ø 测量偶联物浓度:纳米金(20 nm)的最大吸光度(Absmax)为528 nm。为了确定纳米金偶联物的有效浓度,我们建议在将样品稀释到适合您的设备的适当范围后,使用紫外-可见分光光度计测量 Absmax。
试剂盒组成与存储
将试剂盒储存在-20⁰C。偶联剂、反应缓冲液可保存在+4℃或-20℃
实验步骤
Ø 将所有的试剂恢复至室温。
Ø 取500 μL反应缓冲溶液加入1管纳米金中,得到纳米金的分散液;取1管偶联试剂溶解于200 μL纯水中。
Ø 取100 μg抗体/蛋白加入至上一步的纳米金缓冲溶液中,在该混合溶液中,再加入100 μL偶联试剂,混匀后在室温下持续30分钟左右。(注意:偶联试剂需现配现用!)
Ø 反应结束后以9500 rpm,离心20分钟,纯水洗涤2~3次以除去未反应完的抗体/蛋白。
Ø 共轭抗体储存:标记抗体/蛋白后,我们建议将偶联物储存在 +4°C,不要将偶联物储存在 -20°C。偶联物的整体稳定性将由抗体/蛋白本身的稳定性决定,因为它会首先降解。如果您的抗体/蛋白稳定,偶联物也将稳定。
Ø 测量偶联物浓度:纳米金(20 nm)的最大吸光度(Absmax)为528 nm。为了确定纳米金偶联物的有效浓度,我们建议在将样品稀释到适合您的设备的适当范围后,使用紫外-可见分光光度计测量 Absmax。