Làm sinh mệnh hoạt động chủ yếu gánh vác giả, protein công năng vẫn luôn là nghiên cứu khoa học hoạt động trung bị chịu chú ý minh tinh. Protein thông thường không phải “Đơn đả độc đấu”, tuyệt đại đa số công năng protein sẽ cùng mặt khác protein hỗ trợ lẫn nhau, cùng nhau điều tiết khống chế sinh mệnh quá trình. Như vậy, nghiên cứu protein lẫn nhau làm kỹ thuật, ngươi hiểu biết nhiều ít đâu?
Một, miễn dịch cộng lắng đọng lại
Miễn dịch cộng lắng đọng lại (Co-Immunoprecipitation,COIP) kỹ thuật là lợi dụng kháng nguyên kháng thể chi gian có đặc dị miễn dịch kết hợp nguyên lý, ở tế bào phân tách dịch trung gia nhập đặc dị tính kháng thể, đem kháng nguyên cập cùng kháng nguyên kết hợp lòng trắng trứng lắng đọng lại xuống dưới. Miễn dịch hợp chất có thể thông qua Western Blot phương pháp nghiệm chứng kháng nguyên cùng mặt khác lòng trắng trứng chi gian hỗ trợ lẫn nhau, cũng có thể dùng chất phổ phương pháp, kiểm tra đo lường kháng nguyên kết hợp lòng trắng trứng thành viên.
Miễn dịch cộng lắng đọng lại
COIP kỹ thuật ưu khuyết điểm:
Ưu điểm:
(1) được đến lẫn nhau làm lòng trắng trứng là tế bào nội cùng mồi lòng trắng trứng thiên nhiên lẫn nhau làm, phù hợp trong cơ thể chân thật sinh lý tình huống;
(2) thực nghiệm điều kiện ôn hòa, tránh được miễn nhân vi ảnh hưởng;(3) nhưng chia lìa được đến thiên nhiên trạng thái hỗ trợ lẫn nhau lòng trắng trứng hợp chất.
Khuyết điểm:
(1) không thích hợp với kết hợp lực nhược hoặc là nháy mắt kết hợp lòng trắng trứng lẫn nhau làm nghiên cứu.
Nhị, Pull Down
Pull-down kỹ thuật dùng cố tương hóa, đã đánh dấu nhị lòng trắng trứng hoặc nhãn lòng trắng trứng ( sinh vật tố -, PolyHis- hoặc GST-), từ tế bào phân tách dịch trung câu ra cùng chi tướng lẫn nhau tác dụng lòng trắng trứng. Thông qua Pull-down kỹ thuật có thể xác định đã biết lòng trắng trứng cùng câu ra lòng trắng trứng hoặc đã thuần hóa tương quan lòng trắng trứng gian hỗ trợ lẫn nhau quan hệ, từ bên ngoài cơ thể truyền lộ hoặc phiên dịch hệ thống trung kiểm tra đo lường ra lòng trắng trứng hỗ trợ lẫn nhau quan hệ. COIP kiểm tra đo lường đến lòng trắng trứng lẫn nhau làm quan hệ có thể là cái thứ ba lòng trắng trứng làm nhịp cầu thành lập, cùng này so sánh,pull down kỹ thuật nhưng dùng cho kiểm tra đo lường lòng trắng trứng chi gian trực tiếp lẫn nhau làm quan hệ. Nhưng pull down yêu cầu trước đem mồi lòng trắng trứng nguyên hạch biểu đạt thuần hóa ra tới, lại cùng mục đích lòng trắng trứng dung dịch ấp trứng, này vô pháp giống COIP giống nhau bắt chước tế bào nội thiên nhiên lẫn nhau làm hoàn cảnh.
Pull-down kỹ thuật
Tam, song phần tử ánh huỳnh quang bổ sung cho nhau
Song phần tử ánh huỳnh quang bổ sung cho nhau kỹ thuật là chỉ ánh huỳnh quang lòng trắng trứng nhiều chuỗi peptide ở nào đó không bảo thủ axit amin chỗ cắt ra, hình thành không phát ánh huỳnh quang N- cùng C- phía cuối 2 cái nhiều thái đoạn ngắn. Đem này 2 cái ánh huỳnh quang lòng trắng trứng đoạn ngắn phân biệt liên tiếp đến 1 đối có thể phát sinh hỗ trợ lẫn nhau mục tiêu lòng trắng trứng thượng, ở tế bào nội cộng biểu đạt hoặc bên ngoài cơ thể hỗn hợp này 2 cái dung hợp lòng trắng trứng khi, bởi vì mục tiêu protein hỗ trợ lẫn nhau, ánh huỳnh quang lòng trắng trứng 2 cái đoạn ngắn ở không gian thượng cho nhau tới gần bổ sung cho nhau, một lần nữa xây dựng thành hoàn chỉnh có hoạt tính ánh huỳnh quang lòng trắng trứng phần tử, do đó sinh ra ánh huỳnh quang. Khả thị hóa là BiFC kỹ thuật lớn nhất đặc điểm.
Song phần tử ánh huỳnh quang bổ sung cho nhau
Bốn, con men song tạp giao
Con men song tạp giao hệ thống là trước mặt rộng khắp dùng cho protein hỗ trợ lẫn nhau tổ học nghiên cứu một loại quan trọng phương pháp. Này nguyên lý là đương bia lòng trắng trứng cùng mồi lòng trắng trứng đặc dị kết hợp sau, mồi lòng trắng trứng kết hợp với đưa tin gien khởi động tử, khởi động đưa tin gien ở con men tế bào nội biểu đạt, nếu kiểm tra đo lường đến đưa tin gien biểu đạt sản vật, tắc thuyết minh giữa hai bên có hỗ trợ lẫn nhau, phản chi tắc giữa hai bên không có hỗ trợ lẫn nhau. Ở thực tế công tác trung, mọi người căn cứ yêu cầu phát triển đơn tạp giao hệ thống, tam tạp giao hệ thống cùng ngược hướng tạp giao hệ thống chờ.
Trừ cái này ra, nghiên cứu protein lẫn nhau làm phương pháp còn có phệ nhân thể triển lãm kỹ thuật, Plasma cộng hưởng kỹ thuật, kháng thể cùng protein hàng ngũ kỹ thuật chờ.
Hồi phục điểm tán cất chứa mời thảo luận quản lý
Một, miễn dịch cộng lắng đọng lại
Miễn dịch cộng lắng đọng lại (Co-Immunoprecipitation,COIP) kỹ thuật là lợi dụng kháng nguyên kháng thể chi gian có đặc dị miễn dịch kết hợp nguyên lý, ở tế bào phân tách dịch trung gia nhập đặc dị tính kháng thể, đem kháng nguyên cập cùng kháng nguyên kết hợp lòng trắng trứng lắng đọng lại xuống dưới. Miễn dịch hợp chất có thể thông qua Western Blot phương pháp nghiệm chứng kháng nguyên cùng mặt khác lòng trắng trứng chi gian hỗ trợ lẫn nhau, cũng có thể dùng chất phổ phương pháp, kiểm tra đo lường kháng nguyên kết hợp lòng trắng trứng thành viên.
Miễn dịch cộng lắng đọng lại
COIP kỹ thuật ưu khuyết điểm:
Ưu điểm:
(1) được đến lẫn nhau làm lòng trắng trứng là tế bào nội cùng mồi lòng trắng trứng thiên nhiên lẫn nhau làm, phù hợp trong cơ thể chân thật sinh lý tình huống;
(2) thực nghiệm điều kiện ôn hòa, tránh được miễn nhân vi ảnh hưởng;(3) nhưng chia lìa được đến thiên nhiên trạng thái hỗ trợ lẫn nhau lòng trắng trứng hợp chất.
Khuyết điểm:
(1) không thích hợp với kết hợp lực nhược hoặc là nháy mắt kết hợp lòng trắng trứng lẫn nhau làm nghiên cứu.
Nhị, Pull Down
Pull-down kỹ thuật dùng cố tương hóa, đã đánh dấu nhị lòng trắng trứng hoặc nhãn lòng trắng trứng ( sinh vật tố -, PolyHis- hoặc GST-), từ tế bào phân tách dịch trung câu ra cùng chi tướng lẫn nhau tác dụng lòng trắng trứng. Thông qua Pull-down kỹ thuật có thể xác định đã biết lòng trắng trứng cùng câu ra lòng trắng trứng hoặc đã thuần hóa tương quan lòng trắng trứng gian hỗ trợ lẫn nhau quan hệ, từ bên ngoài cơ thể truyền lộ hoặc phiên dịch hệ thống trung kiểm tra đo lường ra lòng trắng trứng hỗ trợ lẫn nhau quan hệ. COIP kiểm tra đo lường đến lòng trắng trứng lẫn nhau làm quan hệ có thể là cái thứ ba lòng trắng trứng làm nhịp cầu thành lập, cùng này so sánh,pull down kỹ thuật nhưng dùng cho kiểm tra đo lường lòng trắng trứng chi gian trực tiếp lẫn nhau làm quan hệ. Nhưng pull down yêu cầu trước đem mồi lòng trắng trứng nguyên hạch biểu đạt thuần hóa ra tới, lại cùng mục đích lòng trắng trứng dung dịch ấp trứng, này vô pháp giống COIP giống nhau bắt chước tế bào nội thiên nhiên lẫn nhau làm hoàn cảnh.
Pull-down kỹ thuật
Tam, song phần tử ánh huỳnh quang bổ sung cho nhau
Song phần tử ánh huỳnh quang bổ sung cho nhau kỹ thuật là chỉ ánh huỳnh quang lòng trắng trứng nhiều chuỗi peptide ở nào đó không bảo thủ axit amin chỗ cắt ra, hình thành không phát ánh huỳnh quang N- cùng C- phía cuối 2 cái nhiều thái đoạn ngắn. Đem này 2 cái ánh huỳnh quang lòng trắng trứng đoạn ngắn phân biệt liên tiếp đến 1 đối có thể phát sinh hỗ trợ lẫn nhau mục tiêu lòng trắng trứng thượng, ở tế bào nội cộng biểu đạt hoặc bên ngoài cơ thể hỗn hợp này 2 cái dung hợp lòng trắng trứng khi, bởi vì mục tiêu protein hỗ trợ lẫn nhau, ánh huỳnh quang lòng trắng trứng 2 cái đoạn ngắn ở không gian thượng cho nhau tới gần bổ sung cho nhau, một lần nữa xây dựng thành hoàn chỉnh có hoạt tính ánh huỳnh quang lòng trắng trứng phần tử, do đó sinh ra ánh huỳnh quang. Khả thị hóa là BiFC kỹ thuật lớn nhất đặc điểm.
Song phần tử ánh huỳnh quang bổ sung cho nhau
Bốn, con men song tạp giao
Con men song tạp giao hệ thống là trước mặt rộng khắp dùng cho protein hỗ trợ lẫn nhau tổ học nghiên cứu một loại quan trọng phương pháp. Này nguyên lý là đương bia lòng trắng trứng cùng mồi lòng trắng trứng đặc dị kết hợp sau, mồi lòng trắng trứng kết hợp với đưa tin gien khởi động tử, khởi động đưa tin gien ở con men tế bào nội biểu đạt, nếu kiểm tra đo lường đến đưa tin gien biểu đạt sản vật, tắc thuyết minh giữa hai bên có hỗ trợ lẫn nhau, phản chi tắc giữa hai bên không có hỗ trợ lẫn nhau. Ở thực tế công tác trung, mọi người căn cứ yêu cầu phát triển đơn tạp giao hệ thống, tam tạp giao hệ thống cùng ngược hướng tạp giao hệ thống chờ.
Trừ cái này ra, nghiên cứu protein lẫn nhau làm phương pháp còn có phệ nhân thể triển lãm kỹ thuật, Plasma cộng hưởng kỹ thuật, kháng thể cùng protein hàng ngũ kỹ thuật chờ.
Hồi phục điểm tán cất chứa mời thảo luận quản lý