Protein tổ nghiên cứu phát triển lấy song hướng điện vịnh kỹ thuật làm trung tâm 。 song hướng điện vịnh từ O’Farrell’s với 1975 năm lần đầu thành lập cũng thành công mà chia lìa ước 1 000 cái E.coli lòng trắng trứng, cũng cho thấy protein phổ không phải ổn định, mà là tùy hoàn cảnh mà biến hóa 。 song hướng điện vịnh nguyên lý đơn giản rõ ràng, đệ nhất hướng tiến hành chờ điện ngắm nhìn, protein duyên pH thang độ chia lìa, đến từng người chờ điện điểm; theo sau, lại duyên vuông góc phương hướng tiến hành phân tử lượng chia lìa 。 trước mắt, theo kỹ thuật bay nhanh phát triển, đã có thể tách ra 10000 cái lấm tấm (spot)。 đương song hướng điện vịnh lấm tấm toàn diện phân tích trở thành hiện thực thời điểm, protein tổ phân tích trở nên được không 。
Hàng mẫu chế bị (sample prepareation) cùng hòa tan đồng dạng sự tình quan 2-DE hiệu quả, mục tiêu là tận khả năng mở rộng này độ hoà tan giải hòa tụ, lấy đề cao độ phân giải 。 dùng hóa học pháp cùng máy móc phân tách pháp rách nát lấy tận khả năng hòa tan giải hòa tụ lòng trắng trứng, hai người liên hợp có hợp tác tác dụng 。 đối IEF(isoelectric focusing) hàng mẫu dự xử lý đề cập hòa tan 、 biến tính cùng hoàn nguyên tới hoàn toàn phá hư lòng trắng trứng gian hỗ trợ lẫn nhau, cũng trừ bỏ như acid nucleic chờ phi lòng trắng trứng vật chất 。
Lý tưởng trạng thái là mọi người ứng một bước hoàn thành lòng trắng trứng hoàn toàn xử lý 。 mà ly dịch tề 2 mol/L lưu niệu cùng mặt ngoài hoạt tính tề 4%CHAPS hỗn hợp dịch thúc đẩy sơ thủy lòng trắng trứng từ IPG(immobilized pH gradients) keo thượng thay đổi 。 tam đinh cơ 膦(Tributyl phosphine,TBP) thay thế được β- khưu cơ etanol hoặc DTT hoàn toàn hòa tan liên thỉnh thoảng liên nội nhị lưu kiện, tăng cường lòng trắng trứng độ hoà tan, cũng dẫn tới chuyển đến đệ nhị hướng gia tăng ]。 hai người thông qua bất đồng phương pháp tới gia tăng lòng trắng trứng độ hoà tan, làm bổ sung cho nhau thuốc thử sẽ càng có hiệu 。
Ở bảo trì hàng mẫu hoàn chỉnh tính tiền đề hạ, nhưng lợi dụng siêu ly cùng acid nucleic nội thiết môi đi trừ acid nucleic (DNA)。 trừ cái này ra, máy móc lực bị dùng để đối lòng trắng trứng phần tử giải tụ, như siêu thanh rách nát ] chờ 。 mặt khác, tăng thêm PMSF chờ protease ức chế tề, nhưng bảo trì lòng trắng trứng hoàn chỉnh tính 。 bởi vì thương phẩm hóa IPG keo điều là khô ráo mất nước, nhưng ở này thủy hóa trong quá trình thêm dạng, bao trùm toàn bộ IPG keo, tránh cho ở hàng mẫu ly trung lắng đọng lại gây ra hàng mẫu mất đi ]。 ngoài ra, thấp phong độ lòng trắng trứng (low abundance protein) ở tế bào nội khả năng có quan trọng điều tiết công năng, đại biểu protein tổ nghiên cứu “Băng sơn chi tiêm”, cố chia lìa thấp phong độ lòng trắng trứng là một loại khiêu chiến 。
Á tế bào phân cấp cùng protein dự phân cấp 、 đề cao thêm dạng lượng ( đã đạt tới 1~15 mg cấp tiêu chuẩn )、 ứng dụng mẫn cảm tính kiểm tra đo lường, có thể đề cao này mẫn cảm tính 。 như một loại nhiều thái miễn dịch 2-DE dấu vết (MI-2DE) là lợi dụng vài loại đơn clone kháng thể kỹ thuật tới phân tích cùng kiểm tra đo lường 。 đề cao tổ lòng trắng trứng cùng hạch đường thể lòng trắng trứng chờ kiềm tính lòng trắng trứng (basic proteins) chia lìa là một khác chỗ khó 。 bởi vì kiềm tính pH trong phạm vi ngưng keo cơ chất không ổn định cập nghịch hướng điện thấm lưu (EOF) sinh ra, đối PI( chờ điện điểm ) vượt qua 10 kiềm tính lòng trắng trứng, thông qua sinh ra?0~10%? Sơn lê thuần thang độ cùng 16% dị Bính thuần nhưng giảm bớt chi 。 cũng nhưng dùng song nhóm methyl Propylene tiên án tới gia tăng cơ chất ổn định tính 。
Phục vụ nội dung:
1、 song hướng điện vịnh hàng mẫu chế bị cùng định lượng;
2、 song hướng điện vịnh cùng hình ảnh phân tích;
3、 song hướng điện vịnh thực nghiệm báo cáo đệ trình 。
Thực nghiệm báo cáo:
1、 song hướng điện vịnh điện tử hình ảnh cập phân tích định lượng kết quả, bao gồm sai biệt dấu chấm câu mã 、 sai biệt bội số;
2、 song hướng điện vịnh hoàn chỉnh thực nghiệm bước đi 、 sử dụng dụng cụ 、 phần mềm kiểm tra tham số chờ
Hàng mẫu chế bị (sample prepareation) cùng hòa tan đồng dạng sự tình quan 2-DE hiệu quả, mục tiêu là tận khả năng mở rộng này độ hoà tan giải hòa tụ, lấy đề cao độ phân giải 。 dùng hóa học pháp cùng máy móc phân tách pháp rách nát lấy tận khả năng hòa tan giải hòa tụ lòng trắng trứng, hai người liên hợp có hợp tác tác dụng 。 đối IEF(isoelectric focusing) hàng mẫu dự xử lý đề cập hòa tan 、 biến tính cùng hoàn nguyên tới hoàn toàn phá hư lòng trắng trứng gian hỗ trợ lẫn nhau, cũng trừ bỏ như acid nucleic chờ phi lòng trắng trứng vật chất 。
Lý tưởng trạng thái là mọi người ứng một bước hoàn thành lòng trắng trứng hoàn toàn xử lý 。 mà ly dịch tề 2 mol/L lưu niệu cùng mặt ngoài hoạt tính tề 4%CHAPS hỗn hợp dịch thúc đẩy sơ thủy lòng trắng trứng từ IPG(immobilized pH gradients) keo thượng thay đổi 。 tam đinh cơ 膦(Tributyl phosphine,TBP) thay thế được β- khưu cơ etanol hoặc DTT hoàn toàn hòa tan liên thỉnh thoảng liên nội nhị lưu kiện, tăng cường lòng trắng trứng độ hoà tan, cũng dẫn tới chuyển đến đệ nhị hướng gia tăng ]。 hai người thông qua bất đồng phương pháp tới gia tăng lòng trắng trứng độ hoà tan, làm bổ sung cho nhau thuốc thử sẽ càng có hiệu 。
Ở bảo trì hàng mẫu hoàn chỉnh tính tiền đề hạ, nhưng lợi dụng siêu ly cùng acid nucleic nội thiết môi đi trừ acid nucleic (DNA)。 trừ cái này ra, máy móc lực bị dùng để đối lòng trắng trứng phần tử giải tụ, như siêu thanh rách nát ] chờ 。 mặt khác, tăng thêm PMSF chờ protease ức chế tề, nhưng bảo trì lòng trắng trứng hoàn chỉnh tính 。 bởi vì thương phẩm hóa IPG keo điều là khô ráo mất nước, nhưng ở này thủy hóa trong quá trình thêm dạng, bao trùm toàn bộ IPG keo, tránh cho ở hàng mẫu ly trung lắng đọng lại gây ra hàng mẫu mất đi ]。 ngoài ra, thấp phong độ lòng trắng trứng (low abundance protein) ở tế bào nội khả năng có quan trọng điều tiết công năng, đại biểu protein tổ nghiên cứu “Băng sơn chi tiêm”, cố chia lìa thấp phong độ lòng trắng trứng là một loại khiêu chiến 。
Á tế bào phân cấp cùng protein dự phân cấp 、 đề cao thêm dạng lượng ( đã đạt tới 1~15 mg cấp tiêu chuẩn )、 ứng dụng mẫn cảm tính kiểm tra đo lường, có thể đề cao này mẫn cảm tính 。 như một loại nhiều thái miễn dịch 2-DE dấu vết (MI-2DE) là lợi dụng vài loại đơn clone kháng thể kỹ thuật tới phân tích cùng kiểm tra đo lường 。 đề cao tổ lòng trắng trứng cùng hạch đường thể lòng trắng trứng chờ kiềm tính lòng trắng trứng (basic proteins) chia lìa là một khác chỗ khó 。 bởi vì kiềm tính pH trong phạm vi ngưng keo cơ chất không ổn định cập nghịch hướng điện thấm lưu (EOF) sinh ra, đối PI( chờ điện điểm ) vượt qua 10 kiềm tính lòng trắng trứng, thông qua sinh ra?0~10%? Sơn lê thuần thang độ cùng 16% dị Bính thuần nhưng giảm bớt chi 。 cũng nhưng dùng song nhóm methyl Propylene tiên án tới gia tăng cơ chất ổn định tính 。
Phục vụ nội dung:
1、 song hướng điện vịnh hàng mẫu chế bị cùng định lượng;
2、 song hướng điện vịnh cùng hình ảnh phân tích;
3、 song hướng điện vịnh thực nghiệm báo cáo đệ trình 。
Thực nghiệm báo cáo:
1、 song hướng điện vịnh điện tử hình ảnh cập phân tích định lượng kết quả, bao gồm sai biệt dấu chấm câu mã 、 sai biệt bội số;
2、 song hướng điện vịnh hoàn chỉnh thực nghiệm bước đi 、 sử dụng dụng cụ 、 phần mềm kiểm tra tham số chờ