IP cùng Co-IP phục vụ
Miễn dịch lắng đọng lại (Immunoprecipitation, IP) là lợi dụng kháng thể đặc dị tính phản ứng thuần hóa phú tập mục đích lòng trắng trứng một loại phương pháp. Kháng thể cùng tế bào phân tách dịch hoặc biểu đạt thượng thanh trung tương ứng lòng trắng trứng kết hợp sau, lại cùng lòng trắng trứng A/G(ProteinA/G) hoặc nhị kháng ngẫu nhiên liên agarose hoặc Sepharose hạt châu ấp trứng, thông qua ly tâm được đến hạt châu - lòng trắng trứng A/G hoặc nhị kháng - kháng thể - mục đích lòng trắng trứng hợp chất, lắng đọng lại trải qua gột rửa sau, trọng huyền với điện vịnh thượng dạng giảm xóc dịch, nấu phí 5-10min, ở cực nóng cập hoàn nguyên tề dưới tác dụng, kháng nguyên cùng kháng thể phân ly, ly tâm thu thập thượng thanh, thượng thanh trung bao gồm kháng thể, mục đích lòng trắng trứng cùng chút ít tạp lòng trắng trứng.
Miễn dịch cộng lắng đọng lại (Co- Immunoprecipitation, Co-IP) là lợi dụng kháng nguyên cùng kháng thể đặc dị tính kết hợp cùng với vi khuẩn Protein A hoặc G đặc dị tính mà kết hợp đến miễn dịch cầu lòng trắng trứng Fc đoạn ngắn hiện tượng khai phá ra tới phương pháp. Này cơ bản nguyên lý là, ở tế bào phân tách dịch trung gia nhập kháng hứng thú lòng trắng trứng kháng thể, ấp trứng sau lại gia nhập cùng kháng thể đặc dị kết hợp kết hợp với Agarose châu thượng Protein A hoặc G, nếu tế bào trung có cùng hứng thú lòng trắng trứng kết hợp mục đích lòng trắng trứng, liền có thể hình thành như vậy một loại hợp chất: “Hứng thú lòng trắng trứng — kháng tính lòng trắng trứng kháng thể —Protein A hoặc G—Agarose châu”, kinh biến tính tụ Propylene tiên án ngưng keo điện vịnh, hợp chất lại bị tách ra. Sau đó kinh miễn dịch dấu vết hoặc chất phổ kiểm tra đo lường mục đích lòng trắng trứng. Loại này phương pháp được đến mục đích lòng trắng trứng là ở tế bào nội cùng hứng thú lòng trắng trứng thiên nhiên kết hợp, phù hợp trong cơ thể thực tế tình huống, được đến kết quả mức độ đáng tin cao. Loại này phương pháp thường dùng với trắc định hai loại mục tiêu protein hay không ở trong cơ thể kết hợp; cũng có thể dùng cho xác định một loại riêng protein tân tác dụng cộng sự.
Ưu điểm
(1) hỗ trợ lẫn nhau protein đều là kinh phiên dịch sau tân trang, ở vào thiên nhiên trạng thái;
(2) lòng trắng trứng hỗ trợ lẫn nhau là ở tự nhiên trạng thái hạ tiến hành, có thể tránh cho nhân vi ảnh hưởng;
(3) có thể chia lìa được đến thiên nhiên trạng thái hỗ trợ lẫn nhau lòng trắng trứng hợp chất.
Khuyết điểm
(1) khả năng kiểm tra đo lường không đến thấp lực tương tác cùng nháy mắt protein - protein hỗ trợ lẫn nhau;
(2) hai loại protein kết hợp khả năng không phải trực tiếp kết hợp, mà khả năng có kẻ thứ ba ở bên trong khởi nhịp cầu tác dụng;
(3) cần thiết ở thực nghiệm trước đoán trước mục đích lòng trắng trứng là cái gì, lấy lựa chọn cuối cùng kiểm tra đo lường kháng thể, cho nên, nếu đoán trước không chính xác, thực nghiệm phải không đến kết quả, phương pháp bản thân có mạo hiểm tính.
(4) độ nhạy không có thân hòa sắc phổ cao.
Phục vụ yêu cầu
Cung cấp mới mẻ hàng mẫu tài liệu cùng IP cập WB một kháng ( hoặc từ ta công ty mua dùm )
Chú: Miễn dịch cộng lắng đọng lại (co-IP) thông thường cần thiết sử dụng chưa kinh đông lạnh tồn mới mẻ lòng trắng trứng hàng mẫu. Bình thường miễn dịch lắng đọng lại tuy rằng có thể sử dụng đông lạnh tồn lòng trắng trứng hàng mẫu, nhưng cũng nghi dùng mới mẻ lòng trắng trứng hàng mẫu vì giai.
Phục vụ cơ bản lưu trình
1. Phân tách hàng mẫu, chuẩn bị lòng trắng trứng hàng mẫu;
2. Chuẩn bị kháng thể -Protein A/G beads;
3. Hàng mẫu, kháng thể -Protein A/G bends cộng ấp trứng;
4. Tẩy thoát;
5. WB kiểm tra đo lường.
Phục vụ báo cáo nội dung
WB kết quả cùng thực nghiệm báo cáo.
Lòng trắng trứng phục vụ như sau: 15830609626
Miễn dịch lắng đọng lại (Immunoprecipitation, IP) là lợi dụng kháng thể đặc dị tính phản ứng thuần hóa phú tập mục đích lòng trắng trứng một loại phương pháp. Kháng thể cùng tế bào phân tách dịch hoặc biểu đạt thượng thanh trung tương ứng lòng trắng trứng kết hợp sau, lại cùng lòng trắng trứng A/G(ProteinA/G) hoặc nhị kháng ngẫu nhiên liên agarose hoặc Sepharose hạt châu ấp trứng, thông qua ly tâm được đến hạt châu - lòng trắng trứng A/G hoặc nhị kháng - kháng thể - mục đích lòng trắng trứng hợp chất, lắng đọng lại trải qua gột rửa sau, trọng huyền với điện vịnh thượng dạng giảm xóc dịch, nấu phí 5-10min, ở cực nóng cập hoàn nguyên tề dưới tác dụng, kháng nguyên cùng kháng thể phân ly, ly tâm thu thập thượng thanh, thượng thanh trung bao gồm kháng thể, mục đích lòng trắng trứng cùng chút ít tạp lòng trắng trứng.
Miễn dịch cộng lắng đọng lại (Co- Immunoprecipitation, Co-IP) là lợi dụng kháng nguyên cùng kháng thể đặc dị tính kết hợp cùng với vi khuẩn Protein A hoặc G đặc dị tính mà kết hợp đến miễn dịch cầu lòng trắng trứng Fc đoạn ngắn hiện tượng khai phá ra tới phương pháp. Này cơ bản nguyên lý là, ở tế bào phân tách dịch trung gia nhập kháng hứng thú lòng trắng trứng kháng thể, ấp trứng sau lại gia nhập cùng kháng thể đặc dị kết hợp kết hợp với Agarose châu thượng Protein A hoặc G, nếu tế bào trung có cùng hứng thú lòng trắng trứng kết hợp mục đích lòng trắng trứng, liền có thể hình thành như vậy một loại hợp chất: “Hứng thú lòng trắng trứng — kháng tính lòng trắng trứng kháng thể —Protein A hoặc G—Agarose châu”, kinh biến tính tụ Propylene tiên án ngưng keo điện vịnh, hợp chất lại bị tách ra. Sau đó kinh miễn dịch dấu vết hoặc chất phổ kiểm tra đo lường mục đích lòng trắng trứng. Loại này phương pháp được đến mục đích lòng trắng trứng là ở tế bào nội cùng hứng thú lòng trắng trứng thiên nhiên kết hợp, phù hợp trong cơ thể thực tế tình huống, được đến kết quả mức độ đáng tin cao. Loại này phương pháp thường dùng với trắc định hai loại mục tiêu protein hay không ở trong cơ thể kết hợp; cũng có thể dùng cho xác định một loại riêng protein tân tác dụng cộng sự.
Ưu điểm
(1) hỗ trợ lẫn nhau protein đều là kinh phiên dịch sau tân trang, ở vào thiên nhiên trạng thái;
(2) lòng trắng trứng hỗ trợ lẫn nhau là ở tự nhiên trạng thái hạ tiến hành, có thể tránh cho nhân vi ảnh hưởng;
(3) có thể chia lìa được đến thiên nhiên trạng thái hỗ trợ lẫn nhau lòng trắng trứng hợp chất.
Khuyết điểm
(1) khả năng kiểm tra đo lường không đến thấp lực tương tác cùng nháy mắt protein - protein hỗ trợ lẫn nhau;
(2) hai loại protein kết hợp khả năng không phải trực tiếp kết hợp, mà khả năng có kẻ thứ ba ở bên trong khởi nhịp cầu tác dụng;
(3) cần thiết ở thực nghiệm trước đoán trước mục đích lòng trắng trứng là cái gì, lấy lựa chọn cuối cùng kiểm tra đo lường kháng thể, cho nên, nếu đoán trước không chính xác, thực nghiệm phải không đến kết quả, phương pháp bản thân có mạo hiểm tính.
(4) độ nhạy không có thân hòa sắc phổ cao.
Phục vụ yêu cầu
Cung cấp mới mẻ hàng mẫu tài liệu cùng IP cập WB một kháng ( hoặc từ ta công ty mua dùm )
Chú: Miễn dịch cộng lắng đọng lại (co-IP) thông thường cần thiết sử dụng chưa kinh đông lạnh tồn mới mẻ lòng trắng trứng hàng mẫu. Bình thường miễn dịch lắng đọng lại tuy rằng có thể sử dụng đông lạnh tồn lòng trắng trứng hàng mẫu, nhưng cũng nghi dùng mới mẻ lòng trắng trứng hàng mẫu vì giai.
Phục vụ cơ bản lưu trình
1. Phân tách hàng mẫu, chuẩn bị lòng trắng trứng hàng mẫu;
2. Chuẩn bị kháng thể -Protein A/G beads;
3. Hàng mẫu, kháng thể -Protein A/G bends cộng ấp trứng;
4. Tẩy thoát;
5. WB kiểm tra đo lường.
Phục vụ báo cáo nội dung
WB kết quả cùng thực nghiệm báo cáo.
Lòng trắng trứng phục vụ như sau: 15830609626