Lòng trắng trứng thuần hóa kỹ thuật là sinh vật nghiên cứu lĩnh vực hạng nhất quan trọng kỹ thuật. Muốn nghiên cứu mỗ một cái đặc thù protein, đầu tiên liền phải đem cái này lòng trắng trứng từ sinh vật thể trung chia lìa thuần hóa ra tới. Lòng trắng trứng thuần hóa phương pháp chủ yếu là lợi dụng bất đồng protein gian tương tự tính cùng sai biệt, căn cứ lòng trắng trứng gian tương tự tính có thể đi trừ phi lòng trắng trứng vật chất, lại căn cứ protein sai biệt tính đem mục đích lòng trắng trứng tách ra tới. Ở bổn văn trung, chúng ta đem giới thiệu 2 loại thường dùng lòng trắng trứng thuần hóa phương pháp.
Ni trụ thân hòa tầng tích
1, tự chế giản dị cây cột, đường kính ước vì 1cm, chiều dài ước vì 2cm, ở cây cột hạ đoan gia nhập nước cất, cũng đóng cửa cây cột xuất khẩu.
2, đem rau câu đường ngưng keo ngã vào cây cột, làm nguyên liệu bổ sung tự nhiên trầm hàng, theo thứ tự dùng nhị đến năm lần cây cột thể tích vô khuẩn thủy, 8mol/L phân u-rê, vô khuẩn thủy tẩy cây cột.
3, thong thả gia nhập 5ml axít Nickel, đến cây cột nhan sắc từ màu trắng biến thành màu lam, đãi màu lục lam thu thập chất lỏng nhỏ giọt tới mới thôi.
4, dùng nhị đến năm lần thể tích PBS giảm xóc dịch cân bằng cây cột, lại đem thô lòng trắng trứng hàng mẫu tiến hành thượng dạng, dùng thang độ độ dày 50mmol/L, 70mmol/L, 150mmol/L, 250mmol/L mễ tọa tiến hành quá trụ, tốc độ chảy ước vì 1ml/min.
5, lấy mỗi cái độ dày dùng 1.5ml Eppendorf thu thập tám quản, lại dùng nhị đến năm lần thể tích vô khuẩn thủy tẩy cây cột, lại dùng nhị đến năm lần 50mmol/L EDTA tẩy cây cột, trừ bỏ NiSO4, đãi đến vô sắc trạng thái
6, dùng nhiều lần thể tích vô khuẩn thủy tiến hành tẩy cây cột, đưa điện thoại di động dịch 10% chia lìa keo tiến hành SDS—PAGE phân tích.
Ly tử trao đổi tầng tích
1, đem macro prep High-Q cường i-on âm trao đổi nguyên liệu bổ sung hỗn đều, hấp thụ 16 ml với tiểu cốc chịu nóng trung, tĩnh trí đãi nguyên liệu bổ sung trầm hàng đến cốc chịu nóng cái đáy, hấp thụ cũng bỏ đi thượng thanh.
2, ở cốc chịu nóng trung gia nhập 4 lần thể tích ddH2O, hỗn đều, tĩnh trí, trầm hàng sau đi thượng thanh. Lặp lại 2 thứ lấy đầy đủ tẩy đi bảo tồn nguyên liệu bổ sung trung etanol.
3, ở không trụ trung gia nhập trụ thể tích 10% trang trụ giảm xóc dịch, tĩnh trí trừ bỏ khả năng tồn tại với trụ vách tường cùng trụ cái đáy lá mỏng thượng bọt khí.
4, lấy 1:1 ( v/v ) tỉ lệ ở cốc chịu nóng trung gia nhập trang trụ giảm xóc dịch ( 20 mM sodium phosphate, pH 7.0, 1 M NaCl ), hỗn đều. Dùng pha lê bổng dẫn lưu gia nhập đến trụ trung, cùng sử dụng trang trụ giảm xóc dịch lấp đầy còn thừa trụ thể tích. Tĩnh trí 30 min.
5, đãi nguyên liệu bổ sung đều trầm hàng đến trụ cái đáy sau, đem thích xứng khí lấy nhỏ lại góc chếch độ cắm vào đến trụ trung nguyên liệu bổ sung đỉnh chóp.
( 1 ) mở ra trụ cấp thấp mở miệng, bằng đại lưu tốc 10 ml/min bơm nhập trang trụ giảm xóc dịch, áp thật nguyên liệu bổ sung.
( 2 ) thong thả hạ thấp giảm xóc dịch tốc độ chảy, cũng đem trang trụ giảm xóc dịch đổi mới thành kết hợp giảm xóc dịch ( 20 mM sodium phosphate, pH 7.0 ).
( 3 ) giả thiết lòng trắng trứng thuần hóa trình tự, sử dụng 15 lần trụ thể tích giảm xóc dịch tuyến tính thang độ tẩy thoát mục đích lòng trắng trứng.
( 4 ) thu thập chảy ra dịch, tiến hành SDS-PAGE kiểm tra đo lường.
( chú ý: Sở hữu tầng tích sở cần dung dịch cùng với lòng trắng trứng hàng mẫu đều yêu cầu sử dụng 0.22 μm lự màng lọc, chút ít dung dịch hoặc lòng trắng trứng hàng mẫu yêu cầu có thể sử dụng kim tiêm thiết bị lọc, đại lượng dung dịch yêu cầu sử dụng 506 dung môi lọc khí tiến hành lọc. )
end